ECM 研究新工具

CHP 可應用在 3D cell matrix 與活體動物模式中,藉助螢光標視形變的膠原蛋白,以直接偵測得 ECM 降解過程!

CHP can be applied in both in-vitro 3D cell matrix and in-vivo animal models to directly detect the process of ECM degradation by visualizing fluorescently labeled unfolded collagens.

Reference:Biomaterials. 2018 Nov;183:67-76.

細胞外間質(ECM)降解的奧秘

細胞外間質(extracellular matrix; ECM)是動物組織的一部份,主要由膠原蛋白 (Collagen)、彈性蛋白 (Elastin)、基膜粘連蛋白 (Laminin)、纖連蛋白 (Fibronectin) 組成,並包含多種糖分子。ECM 為細胞、組織與器官提供結構的支持,並參與各種細胞行為的調節,例如細胞生長、遷移和信號傳遞等過程。 ECM 降解 (ECM degradation) 在許多致命性疾病(如癌症、心血管疾病和器官纖維化等)以及一些常見的退化性疾病(如關節炎和椎間盤退化)的組織重塑中扮演著關鍵角色。然而,我們對這些疾病中 ECM 降解的生理機制和影響的理解,在分子層次上仍然不夠深入。值得注意的是,儘管由蛋白水解酶引發的 ECM 降解 (protease-disrupted ECM) 已被認為是一個重要的生物標記 (Biomarker),但在疾病診斷和病程分期方面的應用仍然有待發展。

技術限制與挑戰:

ECM 降解的研究限制,幾乎是由於當前檢測技術不足所導致。在細胞研究中,過去主要是透過凝膠降解後螢光釋出的方法,或間接以帶有螢光標記的 ECM 蛋白酶 (例如 MMPs) 來標記 ECM 的降解。然而,這些工具或者方法繁瑣,或者因需要進行基因表達,對許多初代細胞或幹細胞研究並不合適。此外,儘管特殊的顯微鏡技術(例如 SHG microscopy)可直接視覺化 ECM 降解,但其在分子層面上的研究,則顯得敏感度不足,且設備與技術取得並不容易。更重要的是,這些技術都不適用於體內 (in-vivo) 檢測,因此在醫學影像方面的應用非常有限。

3Helix CHP was applied to visualize ECM degradation in 3D cell matrix

CHP 的導入與創新

正如在 Biomaterials (2018, Nov) 發表的論文中所示,3Helix 的 Collagen Hybridizing Peptides (CHPs) 能夠在 3D cell matrix 內專一而有效的偵測到因癌細胞轉移引起的 ECM 降解。使用螢光顯微鏡或共軛焦顯微鏡就能簡單而快速的呈現出 ECM 在細胞移動過程中的變化。
圖說:CHP 訊號(青色)標定 MDA-MB-231 細胞外間質 ECM 降解區域,該區域富含有蛋白水分解酶 MMP14(綠色)。細胞核與 Actin 由 Hoechst 33258 (藍色) 以及phalloidin-TRITC (紅色) 染色,Collagen 以抗體進行染色 (白色)。

CHP 的機制原理

CHP 可以應用在 3D cell matrix 與活體動物模式中,專一地結合被蛋白酶降解的 Collagen。

Collagen 是 ECM 最主要的組成成分,其分子具有獨特的三螺旋結構,在 ECM 降解時,會被蛋白酶(例如 MMP、Cathepsin K)切割並展開。而 CHP 具有特殊序列:GPO (O: hydroxyproline),使其能夠在結構上與這些降解的 Collagen 形成新的混合三螺旋,藉此進行專一標記。此外,由於 CHP 電位中性、親水性與富含脯氨酸序列的特性,CHP 對其他生物分子的非特異性結合能力極低,並且能夠在血清穩定而不被降解,非常適合在活體系統中應用。

CHP的應用與成果:

在活體影像系統中,CHP 可以標記 3D cell matrix 與病理上患有蝕骨作用的動物模式中的 unfolded Collagen。特別是新型的 In VIVO CHP,以 CfO ([f: (2S,4S)-4-fluoroproline) 作為基礎序列,能在不需要預先加熱的情況下,仍保持活性,使其能夠在小鼠的活體骨骼組織中成像,呈現出多發性骨髓瘤等病理性骨骼崩壞的過程。In VIVO CHP 介導的體內成像與 micro-CT 結果相符,說明其對骨病變定量評估的精確性。

CHP's advantages over the conventional DQ Collagen

CHP 相較於傳統的 DQ Collagen(一種以 FITC 標記的 Collagen 基質,在受到蛋白酶分解時會發出螢光訊號),更能清楚地把 ECM 中的 Collagen 纖維降解的狀態呈現出來。而 DQ Collagen 的訊號因從 Collagen 纖維上脫落,被細胞吸收,因此失去了典型的纖維形態。