3Helix Inc., distributed by Apical Lab in Taiwan
The New Golden Standard for Collagen Research
Collagen hybridizing peptide (CHP) 是一個新興的 Collagen 標識試劑，可應用於所有 Collagen 的實驗技術 (IHC / WB / in-vivo image / 3D cell culture staining / whole-mount staining)，以及任何因素 (包含發育、癌症、創傷、發炎、病變) 引起的組織損傷與重塑部位。
技術應用
膠原蛋白 (Collagen) 具有獨特的三螺旋結構，穩定存在組織中，並於因疾病、發育、損傷、發炎，或者從實驗步驟中的加熱作用而變性與去結構化而展開 (unfold)。利用這個特性，3Helix 專利的膠原蛋白胜肽（collagen hybridizing peptide; CHP），能特異性地結合這些 unfolded Collagen，並利用螢光、冷光、化學沉澱呈色等方式標記出來，使其能在病理學、生物力學、細胞生物學、再生醫學等領域進行各式的實驗室應用。
Myocardial Infarction
心肌梗塞
小鼠心臟橫截面的螢光掃描圖顯示，在心肌梗塞發生後第七日，以 CHP（紅色）和 Hoechst 33342（藍色）進行辦視，專一性的標記出組織損傷部位。該部位與巨噬細胞 (利用 CD68 抗體標記；see reference) 存在密切的空間關聯性 (ACS Nano. 2017 Oct 24; 11(10): 9825–9835)。
Glomerulonephritis
腎絲球腎炎
在患有腎絲球腎炎的大鼠腎臟冷凍切片中，利用 CHP 並透過 DAB 底物進行 HRP 介導的顯色反應，可清楚辦視腎炎發生的部位(褐色)。細胞核以 hematoxylin 呈色(藍色；ACS Nano. 2017 Oct 24; 11(10): 9825–9835)
Chronological Skin Aging
皮膚老化
以石蠟包埋的大鼠皮膚切片進行 CHP（黃色）與 Hoechst 33342（藍色）染色，清楚呈現分解的膠原蛋白片段在老化皮膚樣本的真皮層中存在 (ACS Nano. 2017 Oct 24; 11(10): 9825–9835)。
技術優勢
CHP 是一種新穎且獨特的多肽，分子結構穩定，在體內和體外實驗都能特異地結合未折疊的 Collagen，以靶向方式結合受損的膠原蛋白。與傳統 Collagen 分析方式相比 (包含使用抗體辦識、酶譜法、TEM、SHG等)，更加快速、專一、穩定、且訊號強大！
快速、專一、穩定、訊號強大
CHP 使用前僅需在 80°C 加熱5分鐘，後放至於冰水浴中即可維持活化態。CHP可直接加入 sample 進行反應，或與抗體或其他染劑 (eg DAPI ，Hoechst 33342) 共同染色！因 CHP 乃利用 Unfolded Collagen 的結構進行結合，因此適用所有物種，以及所有 Collagen 類型 (All collagen types)。
CHP 對 unfolded collagen 具有極高的特異性，但對於一般具有三級結構的 collagen 而言，由於缺乏結合位點，CHP 對其完全沒有親和力。此外，因 CHP 親水性相當高，因此非特異性結合的狀況機乎不存在。
CHP 在室溫下會形成穩定的無活性結構體，可以在室溫下運送。其粉末態於 -20°C可長期保存並不去失活性，而溶解後存放在 4°C 可穩定至少三個月 (R-CHP) 或一年以上 (F-CHP 與 biotin-CHP)，或保存在 -20°C 可達三年以上。特別注意的是，冷凍/解凍循環完全”不”影響其活性，因此不需要特意再分裝。
CHP 可以利用自身接合的螢光( Cy3 或 5-FAM)，或者透過 Biotin 以生物素的顯色方式進行訊號放大、化學呈色反應，可適用在幾乎所有常見的實驗技術中，例如石蠟切片、冷凍切片、細胞染色、Western Blot、活體動物(細胞)染色；此外，CHP的分子量僅抗體的 2%，因此相當容易滲透組織，相當適用於 whole-mount tissue staining、in-situ hybridization 等需要使用到較厚組織樣品的技術。
產品文獻
核心技術背景
在組織重塑過程中，三股螺旋膠原蛋白 Collagen 會被特定的蛋白酶（例如 MMP 或 cathepsin K）降解而延展變性。Collagen hybridizing peptide (CHP) 是一種合成的短胜肽，與單鏈 Collagen 結構基序相似並擁有 Gly-X-Y 重複序列，因此可以通過氫鍵與這些變性的 Collagen fiber 特異性結合，就像 DNA 片段在聚合酶連鎖反應（PCR）過程中與 Primer 結合一樣。而這樣的結合可以發生在一般組織染色上、in vitro staining (eg. 3D cell culture) 與 in vivo labeling (eg. live animal imaging) 實驗平台中，並呈現出強列的訊號得進行量化。
Frequently Asked Questions
常見問題
CHP 要怎麼回溶？有沒有建議的使用濃度？
CHP Stock Solution (100 µM)：在 0.3 mg 的 CHP 粉末中加入 1 mL PBS 或純水，或者在 60 µg 的 CHP 粉末中加入 200 µL PBS 或純水。
建議將 CHP Stock Solution (100 µM) 以 PBS 稀釋 5 倍後製備成第一次實驗測試的 Working Solution (20 µM)，再依實驗結果進行濃度調整。如需共同染色，可將 Working Solution 製備在含有 10% serum 或 5% BSA 的 Blocking Buffer 中，並於加熱/冷卻後加入抗體或其他染劑 (eg. DAPI)。
CHP 的保存方式與效期有多長？
CHP 是相當穩定的短胜肽，活性的降低主要是因為偶聯 (conjugate) 的螢光，而不是 CHP 本身。在我們的實驗中，F-CHP 和 B-CHP 在回溶後存放 4°C 兩年，活性也幾乎不會降低。而 R-CHP 在 4°C 保存後的六個月下降至原活性的 85% 左右。因此我們會建議在回溶後，存放在 4°C 時盡可能在三個月內使用完畢。或者您可以將溶液存放到 -20°C 或 -80°C ，即可放心的長時間使用。此外，我們發現冷凍/解凍的循環並”不會”降底 CHP 的活性，所以即便是冷凍保存，也”不需要”先分裝。
我們了解產品有時會在到達後的幾個月才會打開使用，將粉末形態的 CHP 存放在 -20°C 或 -80°C 中是不會有任何問題的。
每個 CHP 胜肽生產批次間會有差異嗎？
CHP 胜肽是在固相上以化學合成方式製備，並非以重組方法生成，所以可以精準的控制生產中的 CHP 胜肽長度，並確保每個 CHP 胜肽分子僅與一個螢光/生物素基團偶聯標記。因此，每個批次的 CHP 分子量是完全相同的，並且都會通過 HPLC 與 MALDI MS 驗證。
每次使用 CHP 之前都需要加熱嗎？
每次使用 CHP 之前都需要加熱，因為一旦它冷卻下來，並在溶液中存放一段時間，就會逐漸形成三聚體而不具有結合的能力。值得注意的是，加熱/冷卻循環”不會”破壞 CHP 的活性，因此並沒有次數的限制。然而，加熱 Stock Solution 是不必要的，建議會是在配好 Working Solution 後，再加入樣品前進行加熱反應。
如果免疫組織化學需要進行加熱的抗原修復，會影響 CHP 染色嗎？
組織切片在經過加熱進行抗原修復後，會將組織中的 Collagen 三聚體結構打開，而全數結合到 CHP。在這個情況下，CHP 標記並且揭示出組織中所有的 Collagen。如果想利用 CHP 辦視切片中因病變或發炎等生物因素造成的 Collagen 重塑部位，以加熱方式進行抗原修復是不建議的。如果加熱式的修復抗原是必需要的，可以使用相鄰的切片讓 CHP 來標識自然降解或變性的 Collagen。
使用 生物素偶聯的 B-CHP 來增強放大靈敏度會更好嗎？
在多數的情況下，使用 F-CHP、R-CHP、B-CHP 的呈色都是非常靈敏的。但如確實需要更高的訊號效果時，透過 B-CHP 的生物素訊號放大技術，配合例如 AlexaFluor 647、555 等螢光團或 HRP-conjugated Streptavidin，是完全可行的。然後，以此方式放大訊號需留意背景值的出現。
有建議的 Negative Control 嗎？
未經加熱步驟的 CHP 溶液是最好的 Negative Control。如先前所描述，CHP 在溶液中會形成三聚體。在沒有加熱步驟的情況下，這種摺疊的三聚體 CHP 並無法結合 unfolded Collagen；同時，未加熱的 CHP 與加熱後的 CHP又具有相同的化學性質，因此是一個最好的 Negative Control。